Supplementary Materials: Electrophysiological ... - MDPI

2 downloads 0 Views 260KB Size Report
Cesare Montecucco, Aram Megighian, and Ornella Rossetto. Figure S1. Paired pulse facilitation. Example of paired pulse facilitation following paired stimulation.

Toxins 2017, 9, 81; doi:10.3390/toxins9030081 

S1 of S2 

Supplementary Materials: Electrophysiological  Characterization of the Antarease Metalloprotease  from Tityus serrulatus Venom  Irene Zornetta, Michele Scorzeto, Pablo Victor Mendes Dos Reis, Maria E. De Lima,    Cesare Montecucco, Aram Megighian, and Ornella Rossetto 

  Figure S1. Paired pulse facilitation. Example of paired pulse facilitation following paired stimulation  (black arrows) of segmental nerve innervating fibre 6 of abdominal segment 3 in third instar larva  body wall preparation. The second Excitatory postsynaptic potential (EPP) is augmented with respect  to the first EPP. Interstimulus interval is 75 ms (gray double arrow). Calibration bar on the right side  of the figure.  1

2

3

4

5

6

7

8

9

165 125 93 72 57 42 31 24 18 15

  Figure  S2.  Purification  of  recombinant  antarease.  T.  serrulatus  E162A  antarease  was  produced  as  recombinant protein in E. coli and subjected to SDS‐PAGE. Lane 1: molecular weight markers; lane 2:  total protein extract; lanes 3 and 4: washes; lanes 5: surnatant after sarcoside 0.5%; lanes 6‐9: eluted  fractions from the affinity chromatography containing E162A antarease (arrow).   

Toxins 2017, 9, 81; doi:10.3390/toxins9030081 

S2 of S2 

 

Relative amplitude

1.5

Vehicle AntaeraseE162A mutant

1.0

Antaerase

*

0.5

Ve hi cl e

m ut an t

as eE 16 2A

An

ta

er

An ta

er

as e

0.0

Figure S3. EJP Amplitude 500 s after addition of recombinant proteins. Mean ± Standard Deviation  of EJP Amplitudes of 4 experiments for each experimental condition, measured 500 s after addition  of recombinant proteins or vehicle to the bath. EJP amplitudes are relative to the mean of the last 10  EJPs recorded, before adding recombinant proteins or vehicle to the bath, in the same third instar D.  melanogaster  larval  muscle  6/7  of  A3/A4  segment.  Microlectrode  remained  intracellularly  placed  throughout the entire experiment.   

2.5

P2/P1

2.0 1.5 1.0 0.5

20

20

A 50 ntae An 50 tae 1 An ras A r 00 ta e 10 nta ase A era s E n 0 An era 16 tae e r s 2 ta eE A as er e as 162 mu eE A tan 16 mu t 2 A ta m nt 20 uta V nt 50 ehic V le 10 eh 0 icl Ve e hi cl e

0.0

  Figure S4. P2/P1 ratio of double pulse stimulation. Mean ± Standard Deviation of Pulse 2/ Pulse 1  (P2/P1)  of  4  experiments  for  each  experimental  condition,  measured  650  s  after  addition  of  recombinant proteins or vehicle to the bath, when Antaerase was fully effective.